Chongqing, China – Un equipo de científicos desarrolló un método integrado PTP2-qPCR con microscopía de tinción que puede servir para la detección de Enterocytozoon hepatopenaei (EHP) durante todo el período del cultivo de camarón.
Con la finalidad de desarrollar un método cuantitativo más sensible y específico para detectar Enterocytozoon hepatopenaei (EHP) en lo estanques camaroneros, los investigadores de la Southwest University y de la Chongqing Normal University establecieron un método de PCR cuantitativa de fluorescencia SYBR Green I, basado en la secuencia del gen PTP2. Además, los investigadores para proporcionar un seguimiento en tiempo real de EHP en el campo, intentaron cuantificar las esporas de EHP mediante microscopía de tinción.
Microsporidios
Los microsporidios son parásitos obligados, intracelulares, formadores de esporas, y diversas especies infectan a casi todo los invertebrados y vertebrados. Actualmente, se los considera una clase de hongo, y han sido identificados aproximadamente 200 géneros y 1400 especies.
Estos organismos poseen una estructura única y altamente especializada: el tubo polar. El tubo polar es un importante órgano de mecanismo de infección de los microsporidios, mediante el cual transporta el citoplasma a las células huésped.
Enterocytozoon hepatopenaei (EHP)
EHP fue descubierto primero en el camarón tigre negro (Penaeus monodon) en Tailandia. Este parásito infecta principalmente el hepatopáncreas y el tracto gastrointestinal del camarón.
Aunque Enterocytozoon hepatopenaei no es un patógeno fatal para los camarones, y no causa cambios patológicos rápidos en los camarones, es difícil para los camaroneros distinguir rápidamente este patógeno.
EHP puede extenderse horizontalmente en los estanques camaroneros por canibalismo y cohabitación, afectando seriamente el desarrollo del camarón, lo que puede generar pérdidas económicas sustanciales para los camaroneros.
En la actualidad, Enterocytozoon hepatopenaei ha sido reportado en algunos países como China, Vietnam, Brunei, Malasia, Indonesia, India y Venezuela.
EHP está estrechamente relacionado con Ent. bieneusi, que es conocido por infectar a humanos inmunodeprimidos e inmunodeficientes, como los pacientes con SIDA. La mayoría de las infecciones por microsporidios en humanos son zoonóticas y/o transmitidas por el agua. Aunque no existe evidencia de que EHP infecte a otros animales diferentes a los camarones, para la salud humana, es extremadamente importante detectar el EHP en los camarones.
Métodos de detección de EHP
Es necesario desarrollar un método eficiente para detectar camarones infectados con EHP, especialmente para la etapa temprana de la infección. Actualmente, los métodos de detección de EHP son por microscopía y diagnóstico molecular. Sin embargo, el examen microscópico depende principalmente de la habilidad profesional y el juicio subjetivo de los técnicos.
Se ha informado ampliamente la mayo sensibilidad y especificidad de los diagnósticos moleculares para la detección de camarones infectados con EHP, como PCR, qPCR, PCR anidada, ampliación isotérmica mediada por bucle (LAMP), etc. Sin embargo, es bastante conocido que el gen SSU rRNA está muy conservado entre los microsporidios, lo que puede dar resultados falsos positivos. Por lo tanto es necesario elegir un objetivo de diagnóstico más específico.
“Muchas clases de proteínas del tubo polar (PTPs) forman la estructura especial, y estas proteínas juegan un rol importante en la invasión y proliferación de los microsporidios” citan los investigadores.
Ellos indican que con su investigación quieren proveer un método de detección más conveniente de EHP para el cultivo de camarón.
“El uso del método PTP2-qPCR fue recomendado para la detección temprana de la infección de EHP, y el uso de la microscopía de tinción fue más adecuado para el monitoreo en tiempo real de EHP en el campo. Esta metodología integrada puede servir para la detección de EHP durante todo el período de cultivo de los camarones y proveer una referencia para el estudio epidemiológico de EHP” informan los investigadores.
De acuerdo con los investigadores este es el primer método que integra qPCR y microscopía de tinción para la detección de EHP.
“En el cultivo de camarón, cuando la infección de EHP es seria, puede detectarse directamente mediante un microscopio, y cuando la infección de EHP es leve, puede detectarse mediante qPCR. La combinación de estos dos métodos no solo hace que los resultados de la prueba sean más precisos, sino que también previene y controla el EHP de manera oportuna y efectiva” concluyen los investigadores.
Ellos recomiendan que se emplee el método integrado para estudiar las rutas de transmisión de EHP en la cadena alimentaria camarón-humano para monitorear la seguridad de la cadena alimentaria.
La investigación fue financiada por la National Natural Science Foundation of China; Chongqing Foundation and Advanced Research Project; Fundamental Research Funds for the Central Universities; y Project of Science and Technology Research of Chongqing Education Commission of China
Referencia (acceso abierto):
Wang, Lijun; Lv, Qing; He, Yantong; Gu, Ruocheng; Zhou, Bingqian; Chen, Jie; Fan, Xiaodong; Pan, Guoqing; Long, Mengxian; Zhou, Zeyang. 2020. «Integrated qPCR and Staining Methods for Detection and Quantification of Enterocytozoon hepatopenaei in Shrimp Litopenaeus vannamei.» Microorganisms 8, no. 9: 1366. https://doi.org/10.3390/microorganisms8091366
